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基因治療2.0時(shí)代,誰將成為基因藥物明日之星?

發(fā)布者:優(yōu)普惠發(fā)布時(shí)間: 2017.11.20 0
基因治療1.0時(shí)代:螺旋前進(jìn)


1953年,沃森和克里克發(fā)現(xiàn)了DNA雙螺旋結(jié)構(gòu),開啟了分子生物學(xué)時(shí)代。


1963年,DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)發(fā)表10年,喬舒亞·萊德伯格提出了基因交換和基因優(yōu)化的理念。


1972年,西奧多·弗里德曼,提出了基因治療是否可以用于人類疾病治療的假設(shè)。


1984年,Cepko CL成功設(shè)計(jì)出可以有效地將外來基因插入哺乳動(dòng)物染色體的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體系統(tǒng)。


1990年9月14日,美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)批準(zhǔn)第一個(gè)基因治療的臨床研究,四歲的Ashanti DeSilva第一個(gè)接受了腺苷脫氨酶缺陷導(dǎo)致的重癥聯(lián)合免疫缺陷(ADA-SCID)基因治療。此后,全世界大約有4000名患者參與了500多個(gè)基因治療的臨床試驗(yàn)項(xiàng)目。


1999年9月13日,18歲的杰西·格爾辛格死于腺病毒載體基因治療引起的多器官衰竭,主要原因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)對(duì)腺病毒載體的過度反應(yīng)。FDA暫停了大部分臨床試驗(yàn),重新對(duì)基因治療的倫理和技術(shù)實(shí)施重新評(píng)估。


杰西·格爾辛格的死終結(jié)了基因治療的瘋狂大躍進(jìn)時(shí)代,資本界的寒冬迫使研究者摒棄商業(yè)誘惑,重新回歸學(xué)術(shù)和理性。


2006年8月,美國《科學(xué)》雜志披露基因治療成功的治療了兩個(gè)患者的轉(zhuǎn)移性黑色素瘤,基因治療開始逐漸的走出困境。


基因治療2.0時(shí)代:元年開啟


基因治療1.0時(shí)代治療失敗的原因有2個(gè),一是導(dǎo)入的重組基因被插入到基因組的錯(cuò)誤位置,從而激活了致癌基因,二是因?yàn)檩d體病毒引起患者免疫系統(tǒng)的過度反應(yīng),從而導(dǎo)致多器官功能衰竭以及腦死亡。


基因治療2.0時(shí)代,研究人員使用了新型高效的病毒將新的重組基因轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中,從而克服了1.0時(shí)代的很多問題。主要包括兩種基因療法,分別以治療LPLD的Glybera腺相關(guān)病毒載體(AAV)和治療SCID的Strimvelis 逆轉(zhuǎn)錄病毒(Retrovirus)或慢病毒(Lentivirus)載體為代表。所謂成也病毒,敗也病毒。


2012
10月,EMA批準(zhǔn)uniQure的Glybera上市許可,成為歐盟歷史上首個(gè)批準(zhǔn)的基因治療藥物,其用于脂蛋白脂肪酶缺乏(LPLD)的成年患者的基因治療。盡管Glybera的治療費(fèi)用高達(dá)100萬美元 ,但Glybera的上市開啟了基因藥物治療的春天。
2013
11月,美國FDA正式發(fā)布《在研細(xì)胞與基因治療產(chǎn)品臨床前評(píng)估指南》(Guidance for Industry: Preclinical Assessment of InvestigationalCellular and Gene Therapy Products),該指南替代其1998年頒布的《人體細(xì)胞療法與基因治療指南》(Guidance for Industry: Guidance for Human Somatic Cell Therapy andGene Therapy)。
2016
5月,EMA批準(zhǔn)了GSK和意大利伙伴Telethon、OSR共同研發(fā)的基因療法Strimvelis上市,用于治療腺苷脫氨酶缺陷導(dǎo)致的重癥聯(lián)合免疫缺陷(ADA-SCID)?!堵槭±砉た萍荚u(píng)論》(MIT Technology Review)報(bào)道, Strimvelis一次性療法的價(jià)格為66.5萬美元,為一次性終身治愈,并承諾無效退款。
2017
2月,《MITTechnology Review》公布了“2017年全球十大突破性技術(shù)”榜單,其中包括:基因治療2.0。Glybera和Strimvelis的批準(zhǔn),標(biāo)志著基因治療曲折發(fā)展50年后,終于在21世紀(jì)的第二個(gè)10年迎來了春天,基因藥物成為繼化學(xué)小分子藥物、生物大分子藥物之后的第三代治療藥物。
AAV vector


Glybera由非復(fù)制型腺相關(guān)病毒(AAV載體和包裹在其中的LPL重組基因組成。與杰西·格爾辛格致死的腺病毒載體不同,AAV來自細(xì)小病毒家族,是目前發(fā)現(xiàn)的一類結(jié)構(gòu)最簡(jiǎn)單的單鏈DNA缺陷型病毒,它編碼兩個(gè)末端的反向重復(fù)序列(ITR)中的cap和rep基因。AAV是非致病性的(大多數(shù)人攜帶這種無害的病毒),與腺病毒相反,大多數(shù)用AAV治療的人不會(huì)產(chǎn)生免疫應(yīng)答。


重組腺相關(guān)病毒載體(rAAV) 即將AAV中的cap和rep基因替換成目標(biāo)基因,如Glybera中的LPL基因(見下圖),LPL基因不插入細(xì)胞的染色體中,作為獨(dú)立的DNA自由漂浮保留在細(xì)胞核中。由于AAV僅含衣殼蛋白和目標(biāo)基因,因此具有安全性好、宿主細(xì)胞范圍廣(能感染分裂和非分裂細(xì)胞)、免疫源性低,在體內(nèi)表達(dá)外源基因時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn),成為現(xiàn)階段在世界范圍內(nèi)應(yīng)用最廣的基因載體。目前進(jìn)入臨床三期主要涉及的治療領(lǐng)域有遺傳性視網(wǎng)膜營養(yǎng)不良、血友病等。


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提到AAV就不得不提此領(lǐng)域的先鋒賓夕法尼亞大學(xué)(University of Pennsylvania comprises),沒錯(cuò),就是和藥明康德在費(fèi)城合作建設(shè)145,000平方英尺cGMP工廠的那個(gè)。Penn發(fā)明的AAV2.0技術(shù)(Glybera為AAV1.0傳統(tǒng)技術(shù))已授權(quán)給REGENXBIO(NSDQ:RGNX)進(jìn)行商業(yè)化開發(fā),已經(jīng)研發(fā)出100種以上AAV亞型,約70%處于臨床階段的rAAV項(xiàng)目均采用此技術(shù)平臺(tái),已經(jīng)和REGENXBIO合作的公司有ADVERUM、AVEGIS、AUDENTES、SHIRE、BIOGEN、DIMENSION、ESTEVE、LYSOGENE、VOYAGER。目前,Penn公司已發(fā)明AAV3.0技術(shù):擁有更強(qiáng)的遞送能力和效率,更低的免疫原性,更適合基因組編輯,從而能靶向干細(xì)胞和祖細(xì)胞(見下圖)。

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Retrovirus/Lentivirus vector


在歐洲估計(jì)每年約15名患者發(fā)生ADA-SCID,在美國約為12名,常規(guī)的酶替代療法需要每周注射。Strimvelis是第一種離體造血干細(xì)胞(HSC)基因治療,從患者提取造血干細(xì)胞并純化,刷選僅表達(dá)CD34 的細(xì)胞,然后用含有人腺苷脫氨酶基因(ADA基因)的逆轉(zhuǎn)錄病毒GSK2696273 (MoMLV)轉(zhuǎn)導(dǎo),然后再輸注到患者體內(nèi)(CD34 的細(xì)胞濃度為1-10百萬個(gè)/ml)。這些細(xì)胞在人的骨髓中生根,復(fù)制并產(chǎn)生成熟的細(xì)胞并產(chǎn)生正常起作用的腺苷脫氨酶蛋白。目前18例接受Strimvelis治療的ADA-SCID患者仍然存活。一項(xiàng)關(guān)鍵性研究顯示,所有兒科ADA-SCID患者接受Strimvelis治療后3年的存活率達(dá)100%。Strimvelis只需給藥一次,而且不依賴于第三方捐獻(xiàn)者,不存在因排斥引發(fā)的免疫不相容風(fēng)險(xiǎn)。


逆轉(zhuǎn)錄病毒在癌癥和干細(xì)胞基因療法中被廣泛使用,可以通過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)導(dǎo)cDNA和shRNA。大多數(shù)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒來自MoMLV(莫洛尼鼠白血病病毒)或MSCV(鼠干細(xì)胞病毒),其包括包裝基因 (Gag-Pol) 和包膜基因(ENV)(見下圖)。 Gag是結(jié)構(gòu)性前體蛋白, Pol是聚合酶, ENV可以被改造(不攜帶表達(dá)病毒蛋白的基因),從而改變感染性。長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)基因的存在,其促進(jìn)重組基因整合到宿主基因組中。


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慢病毒(Lentivirus)屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種,和普通逆轉(zhuǎn)錄病毒不同,可以感染分裂期和非分裂期的哺乳動(dòng)物細(xì)胞。慢病毒的轉(zhuǎn)染需要同時(shí)存在包裝輔助質(zhì)粒和包膜輔助質(zhì)粒制粒(見下圖),其中VSV-G包膜輔助質(zhì)粒可以使慢病毒感染更寬范圍的細(xì)胞?,F(xiàn)階段慢病毒研究發(fā)展得很快,大量使用慢病毒載體的基因藥物已經(jīng)進(jìn)入臨床III期,主要涉及治療領(lǐng)域有腦白質(zhì)腎上腺營養(yǎng)不良癥、地中海貧血、粘多糖病等。


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基因治療2.0時(shí)代:明日之星


2014年4月,美國FDA授予Celladon公司旗下的心衰基因療法MYDICAR“突破性療法”認(rèn)定。這是FDA首次批準(zhǔn)的基因療法。


201411月,FDA授予Spark Therapeutics公司在研產(chǎn)品SPK-RPE65“突破性療法”地位,用于治療由于RPE65基因突變所導(dǎo)致的先天性利伯氏黑蒙癥患者的夜盲癥。


2015年2月,F(xiàn)DA授予BLUEBIRD公司的LentiGlobin BB305“突破性療法”認(rèn)定,治療地中海貧血病的基因治療。


2016年7月,F(xiàn)DA授予輝瑞和Spark共同研發(fā)的B型血友病試驗(yàn)性新藥SPK-9001 “突破性療法”認(rèn)定。


2016年7月,F(xiàn)DA授予AveXis公司在研新藥AVXS-101“突破性療法”認(rèn)定,用于治療 I 型脊髓性肌萎縮癥(Spinal Muscular Atrophy,SMA)的兒童患者。


2017年1月,F(xiàn)DA授予uniQure 公司AMT-060“突破性療法”認(rèn)定,用于B型血友病的治療。


2017年2月,F(xiàn)DA授予Tocagen公司其在研療法Toca 511 & Toca FC“突破性療法”認(rèn)定資格,用于治療復(fù)發(fā)性高級(jí)別膠質(zhì)瘤(high grade glioma)。


目前,美國尚無真正意義的基因治療藥物上市(反義核苷酸等除外),截止2017年3月,正處于臨床III期的藥物有13個(gè),其中造血干細(xì)胞(HSC)治療領(lǐng)域3個(gè)、肝基因相關(guān)領(lǐng)域1個(gè)、視網(wǎng)膜基因治療領(lǐng)域2個(gè)、腫瘤領(lǐng)域4個(gè)、神經(jīng)性疾病領(lǐng)域3個(gè)(見下表。微信消息發(fā)送“基因療法”,可獲得Excel版詳細(xì)pipeline的下載鏈接)。


處于III期階段的基因治療藥物

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注:數(shù)據(jù)來源Cortellis,此表不包含反義核苷酸、核酸適配體、腫瘤疫苗、CAR-T、溶瘤病毒、干擾RNA


在基因治療領(lǐng)域,Spark和Bluebird為當(dāng)之無愧的兩大明星,分別代表了AAV載體技術(shù)平臺(tái)和Lentivirus載體技術(shù)平臺(tái)的領(lǐng)頭羊。


Spark為AAV載體的死忠粉(見下圖),其治療視網(wǎng)膜疾病的SPK-RPE65已經(jīng)完成三期臨床,預(yù)計(jì)2017年早期向FDA遞交生物制品許可申請(qǐng)(BLA),有望成為第一家邁入美國市場(chǎng)的基因療法新創(chuàng)公司。Spark還擁有處于I/II臨床階段的SPK-7001(脈絡(luò)膜缺失癥)、SPK-8001(A型血友?。PK-9001(B型血友?。?,均采用AAV病毒作為載體。


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Bluebird為L(zhǎng)entivirus載體的堅(jiān)決擁護(hù)者(見下圖),治療ALD的Lenti-D和治療β地中海貧血的LentiGlobin均處于三期臨床招募階段,盡管LentiGlobin在β地中海貧血中的前期臨床數(shù)據(jù)不理想,導(dǎo)致其股價(jià)從194美元一度跌至35美元,但是其治療鐮狀細(xì)胞疾病的臨床(NCT02151526)在2017年迎來開門紅,3月2日《New England Journal of Medicine》期刊報(bào)道一名15歲患有兩年鐮狀細(xì)胞貧血癥的法國少年,在接受LentiGlobin治療后,該男孩已能夠產(chǎn)生足夠多的正常血細(xì)胞。


同時(shí),Bluebird還擁有癌癥免疫治療和基因編輯兩大技術(shù)平臺(tái),其中CART治療藥物BB2121已經(jīng)進(jìn)入臨床階段。

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以下為部分基因治療公司的Pipeline,項(xiàng)目太多,在此不做具體介紹。


1

uniQure

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2

Gensight

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3

VBL

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4

Anges

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5

Orchard 

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6

BioMarin (關(guān)注BMN270)

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7

lysogene

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8

Tocagen

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9

regenxbio(AAV2.0技術(shù))

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10

Moderna(mRNA技術(shù))

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基因治療2.0時(shí)代:大浪淘沙


Cortellis數(shù)據(jù)庫收錄的以Gene therapy為關(guān)鍵詞的藥物統(tǒng)計(jì)結(jié)果見下圖,處于發(fā)現(xiàn)階段的項(xiàng)目高達(dá)974項(xiàng),處于臨床階段的474項(xiàng),處于上市及注冊(cè)階段的18項(xiàng)。


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上述項(xiàng)目與基因治療相關(guān)的公司高達(dá)95家(如下表所示),但也可謂是百家爭(zhēng)鳴,良莠不齊。

















AAV Vectors

4D Molecular Therapeutics

Abeona Therapeutics

Acucela

Adverum Biotechnologies

Agilis Biotherapeutics

AGTC

Allergan (Retrosense Tx  acquisition)

Audentes Therapeutics

AveXis

Biogen

BioMarin

CombiGene 

Dimension Therapeutics

Esteve

Freeline Therapeutics

Genethon 

Gensight Biologics 

Global BioTherapeutics

Homology Medicines

HORAMA

Lysogene

Milo Biotechnology

NightstaRx  

Pfizer (Bamboo Tx  acquisition) 

REGENXBIO

Shire

Solid Biosciences

Spark Therapeutics

Theragene Pharmaceuticals

uniQure    

Voyager Therapeutics
















Lenti/Retroviral 

Vectors

Adaptimmune

AVROBIO

Bellicum Pharmaceuticals

bluebird bio

Calimmune

Celgene

Cellular Biomedicine Group

Cellectis/Pfizer

Celyad

Editas Medicine

EMD Serono

Errant Gene Therapeutics

Fate Therapeutics

Fibrocell Science

GE Healthcare Life Sciences

Genenta Science 

GSK

Immunocore

Insulete

Juno Therapeutics

Kite Pharma

MaxCyte 

Medigene

NexImmune

Novartis

Opexa Therapeutics  

Orchard Therapeutics

Oxford BioMedica

Poseida  Therapeutics/Janssen 

Rocket Pharma

Takara Bio 

Tocagen

Unum Therapeutics

ZIOPHARM Oncology





Adenoviral Vectors

Angionetics (Taxus Cardium

Pharmaceuticals)

Cell Medica

GenVec

Global Biotherapeutics

Aevi Genomic Medicine  (formerly

Medgenics)

PeriphaGen

Renova Therapeutics






Genome Editing

Biogen

bluebird bio

Caribou Biosciences

Cellectis

CRISPR Therapeutics

Casebia Therapeutics  (Bayer/CRISPR)

Editas Medicine

Homology Medicines

Intellia Therapeutics 

Poseida Therapeutics

Precision BioSciences

Sangamo Therapeutics

Universal Cells






Enabling Platforms

Aldevron

Brammer Bio

Cell Design Labs

Cognate BioServices

EMD Millipore

Intrexon

Lonza

PCT Caladrius

PharmaCell

Synpromics

ThermoFisher Scientific

WuXi AppTec


據(jù)Informa統(tǒng)計(jì),2016年全年基因療法相關(guān)企業(yè)融資共計(jì)28億美元,相比2015年69億美元出現(xiàn)大幅下降。下圖為近三年基因療法和細(xì)胞療法的融資總額, 2016年IPO融資情況如下:Intellia $124.2M 、Editas $108.6M 、AveXis $95M 、Audentes $85.1M 、CRISPR $56M 、GenSight €45.2M 、TiGenix $35.7M 、MaxCyte $14.2M 、Cellect $8.4M。


相比作為基因治療元年的2015年,2016年融資熱度的減少對(duì)基因治療長(zhǎng)遠(yuǎn)來說未必是壞事,基因治療需要一個(gè)量變到質(zhì)變的過程!


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結(jié)語


雖然目前已經(jīng)針對(duì)多種罕見的疾病成功開發(fā)出了基因療法,像SCID和血友病這樣的疾病,這些罕見病都已明確基因突變。但是對(duì)于那些具有復(fù)雜遺傳病因的常見疾病,開發(fā)對(duì)應(yīng)的基因療法則更加困難,諸如阿爾茨海默病、糖尿病和心力衰竭等疾病,它們不僅涉及到多個(gè)基因,并且在患有同種疾病的不同病人中,對(duì)應(yīng)的基因突變還不完全相同。2015年4月,Celladon宣布其心衰藥物Mydicar 在一個(gè)叫做CUPID2二期臨床徹底失敗,F(xiàn)KD 也暫停了其SCH 721015心衰的適應(yīng)癥。


盡管基因治療路途坎坷,但是隨著crispr/cas基因編輯技術(shù)、mRNA新型藥物技術(shù)的應(yīng)用和載體技術(shù)的不斷完善,相信基因治療徹底治愈常見疾病終究不會(huì)是技術(shù)問題,只是時(shí)間問題罷了。


參考文獻(xiàn):

  1. https://en.wikipedia.org/wiki/Gene_therapy

  2. https://www.technologyreview.com/s/603498/10-breakthrough-technologies-2017-gene-therapy-20/

  3. https://en.wikipedia.org/wiki/Strimvelis

  4. https://en.wikipedia.org/wiki/Alipogene_tiparvovec

  5. https://www.med.upenn.edu/gtp/


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